1、Mirus廣譜DNA轉染試劑TransIT®-LT1、TransIT®-2020和TransIT-X2®三者的區別是什么?
5、ransIT-X2® Dynamic Delivery System的主要成分是什么?
6、TransIT-X2® Dynamic Delivery System和PEI(Polyethyeleneimine)是類似的東西嗎?
1、Mirus廣譜DNA轉染試劑TransIT®-LT1、TransIT®-2020和TransIT-X2®三者的區別是什么?
TransIT®- LT1、TransIT®-2020和TransIT-X2®都是高效的廣譜轉染試劑,但它們的化學性質不同,三者特點見下表。TransIT-X2是首選用于高效基因表達及敲除的廣譜轉染試劑。TransIT-X2能高效地轉染質粒DNA和siRNA,也可用于二者共轉。TransIT®-LT1和TransIT®-2020僅適用于質粒DNA的轉染。TransIT®-2020和TransIT-X2®都是無動物源成分配方,因此可滿足有條件限制的應用需求,例如藥物開發等。對于不同的細胞類型,不同轉染試劑表現效果也有所不同,因此對于不同細胞類型的具體應用,可以參考我們的轉染試劑推薦方案數據庫Reagent Agent。(https://www.mirusbio.com/tech-resources/transfection-database)
特點 |
TransIT-X2® Dynamic Delivery System |
TransIT®-2020 Transfection Reagent |
TransIT®-LT1 Transfection Reagent |
轉染核酸類型 |
DNA, siRNA, miRNA, pre-miRNA |
DNA |
DNA |
細胞毒性 |
低 |
低 |
極低 |
高效基因敲除 |
? |
不適用* |
不適用* |
DNA與siRNA共轉 |
? |
不適用 |
不適用 |
動物源成分 |
無 |
無 |
有 |
*注:目的基因敲除也可以通過轉染編碼shRNA的質粒DNA來實現,但該方法敲除基因不如siRNA/miRNA高效。
2、TransIT®-LT1轉染試劑的主要成分是什么?
TransIT®-LT1是一種非脂質體的廣譜轉染試劑,主要配方是由脂質及蛋白/聚胺混合物組成。它是市面上第一款脂類/聚合物復合配方轉染試劑,同時具備高轉染效率和低細胞毒性特征。
3、TransIT®-2020轉染試劑的主要成分是什么?
TransIT®-2020是一種專利的脂類-聚合物混合配方轉染試劑,可與DNA形成多聚物脂復合物。TransIT®-2020配方中不含任何動物源成分。
4、TransIT®-2020適用于轉染哪些細胞?
TransIT®-2020是廣譜轉染試劑,適用于轉染多種類型細胞。
· 細胞系,包括貼壁細胞和懸浮細胞(例如HepG2, MCF-7, Neuro-2a,K562,Jurkat等)點擊右側鏈接可以查看適用TransIT®-2020轉染的細胞系類型View a complete listing of cell lines transfected using TransIT®-2020 (PDF),
· 原代細胞和干細胞View a complete listing of primary and stem cells transfected using TransIT®-2020 (PDF)。
5、TransIT-X2® Dynamic Delivery System的主要成分是什么?
TransIT-X2® Dynamic Delivery System是一種先進的非脂質體轉染系統,由一種全新型聚合物搭配Mirus專利配方,更容易與核酸形成復合物,適用于質粒DNA與小分子核酸如siRNA、miRNA、pre-miRNA等的高效轉染。此外,TransIT-X2®還能實現質粒DNA與siRNA共轉染。TransIT-X2®配方中不含任何動物源成分。
6、TransIT-X2® Dynamic Delivery System和PEI(Polyethyeleneimine)是類似的東西嗎?
不是的。TransIT-X2®是一種全新的聚合物配方,并非基于PEI的改良產品。
7、TransIT-X2®可用于貼壁和懸浮細胞轉染嗎?
可以。經測試,我們已經用TransIT-X2成功轉染過多種貼壁細胞(如CHO-K1,HepG2,原代人乳腺上皮細胞等)和懸浮細胞(如Freestyle 293-F等)。
8、TransIT-X2®可以轉染原代細胞嗎?
可以。TransIT-X2®適用于轉染多種原代細胞,我們已經測試過HUVECs,原代人乳腺上皮細胞(HMEC)以及正常人皮膚成纖維細胞(NHDF)等原代細胞轉染效率都不錯。
9、TransIT-X2®可以轉染神經細胞嗎?
可以。我們測試過iCell® Neurons, SH-SY5Y, SK-N-MC and PC-12等神經細胞轉染效率都很不錯。點擊右側鏈接可以查看適用TransIT-X2®轉染的細胞類型以及推薦用量。View a complete listing of cell types transfected using TransIT-X2® by Mirus scientists and corresponding starting reagent-to-nucleic acid ratios. (PDF)
10、抗生素會影響轉染試劑的作用嗎?
某些抗生素如卡那霉素是陽離子,會抑制轉染試劑/核酸形成復合物,因此我們建議在轉染試劑復合物形成這一環節不要使用抗生素。待轉染試劑復合物形成后,我們就可以加入到含有低水平抗生素的完全細胞培養基里了(例如將100×青-鏈霉素雙抗稀釋到0.1-1×工作濃度的細胞培養基)。
11、如何優化轉染效率?
1) 轉染時的細胞密度 (%) :大多數細胞在轉染時細胞密度最好能達到40%-80%,但是不同類型細胞有其最佳的轉染密度,在優化轉染效率時要先確認細胞的最佳轉染密度;
2) 轉染試劑與DNA比例:轉染試劑與DNA的使用比例通常是1-4ul每1ugDNA,不同細胞可根據實際轉染效率進行不同配比的優化;
3) DNA質粒的質量:轉染用的DNA必須是無菌,高濃度,且去除內毒素的質粒。Mirus有一款內毒素去除試劑盒(MiraCLEAN® Endotoxin Removal Kit,貨號MIR5900/MIR5910)可以去除質粒中殘存的內毒素;
4) 轉染試劑與核酸形成復合物要在無血清的培養基中進行:血清可能會干擾轉染試劑與核酸形成復合物,因此在配置轉染試劑與核酸復合物時需要用無血清、無抗生素的培養基,而將復合物加入細胞的時候,細胞培養基里是可以含血清的。
12、轉染結果不理想時該怎么辦?
Mirus每款轉染試劑的說明書最后都有TROUBLESHOOTING GUIDE,可以幫助客戶對照結果查找問題原因,大部分轉染不理想的問題都可以通過優化操作步驟來解決,因此每一個使用Mirus轉染試劑的客戶,都應在轉染前認真閱讀產品說明書。